在奈良时代，「お」读“o”，「を」读“wo”，二者有明确的不同。
 

　　10世纪以前，两个假名的读音都是这样的。但是在11世纪以后就开始有所混淆，变得都读作“wo”，而江户时代又开始都读作“o”并延续至今。

　　也就是说，从江户时代，「を」的发音和「お」变得一样!
 

　　而到了目前，「お」一般是和其他假名组成单词或者词组出现的(也会经常以接头词的形式出现，比如：お元気ですか)。

　　而「を」是一个比较特殊的假名，它一般不可以同其他假名组成单词或者句子，而是单独以格助词的形式出现并使用的。(比如：ラーメンを食べる)

　　其次，可以从他们的罗马音，和输入法来区分。「お」的罗马音标是 o ，而「を」的罗马音标是 wo 。